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Fujifilm wako質譜級賴氨酰肽鏈內切酶
  • 品牌:wako
  • 產地:國外
  • 型號:20 μg×5
  • 貨號:125-05061
  • 純度:100
  • 價格: ¥3000/支
  • 發(fā)布日期: 2025-03-03
  • 更新日期: 2025-03-03
產品詳請
產地 國外
品牌 wako
貨號 125-05061
用途 科研
包裝規(guī)格 20 μg×5
CAS編號
純度 100%
是否進口



  本產品是質譜分析前處理時常用的蛋白分解酶即賴氨酰肽鏈內切酶,該酶可以特異性切除賴氨酸基團C末端的多肽,可用于蛋白測序分析和 Lys-X 化合物的酶合成。若同時使用賴氨酰肽鏈內切酶和胰酶,可更好地切斷賴氨酸基團的多肽,增加多肽的數量。產品已按照使用習慣做成小包裝,是方便使用的冷凍干燥品。20 μg/支可用于100-200個樣品的凝膠內消化。


來源:細菌

外觀:凍干粉(包含2 mmol/L Tris-HCl 緩沖液,pH8)

活性:0.03~0.07 AU/vial

分子量:27,000(瓊脂糖過濾),30,000(SDS-PAGE)

溶解性:溶于水或緩沖液

穩(wěn)定性:溶解于 pH 值 5.0-12.0 的 Tris 緩沖液中,可在4℃穩(wěn)定保存2年;在 pH 值 6.0-11.0、30℃時能穩(wěn)定保存,但溫度超過50℃時不穩(wěn)定。

最適pH值:9.0~9.5

等電點:6.9~7.0 

底物特異性:

可水解底物——Tos-Lys-OMe、Bz-Lys-NH2、Bz-Lys-pNA、Lys-pNA

不可水解底物——Bz-Arg-NH2、Bz-Arg-pNA、Arg-pNA

抑制劑:DFP、PMSF、TLCK



特點


●  高特異性、高蛋白質消化率、適用于蛋白質譜分析

  提高裂解效率、增加肽段數量

  根據使用量特意制備小包裝,方便使用



應用


  分別采用胰蛋白酶(Tp、賴氨酰肽鏈內切酶(Lys-C)和 Tp與Lys-C 聯用進行膠內酶切的效果比較。

  牛血清蛋白 BSA 的條帶(100 ng)通過 SDS-PAGE 獲得,然后分別用 Tp、Lys-C 和 Lys-C+Tp 進行酶切,再用 MALDI-TOFMS 法進行分析。

  這些蛋白酶的實驗效果見下表。


表 1:Tp、Lys-C 和 Lys-C+Tp 的結果對照

這些結果表明 Lys-C 酶解的漏切位點數(Missed Cleavage)最少。Tp 酶解時加入 Lys-C 后,漏切位點數有所降低,同時,可以鑒定出更多的多肽。



Tp 

Lys-C

Lys-C+Tp

裂解位點

精氨酸和賴氨酸的C端 

賴氨酸的C端 

精氨酸和賴氨酸的C端

漏切位點數

(漏切位點所占比例)

多(8%)

很少(0%)

少(3%)

鑒定出的多肽數量 

17

19

22



胰蛋白酶(Tp)(圖 a)和賴氨酰肽鏈內切酶(Lys-C)+Tp( 圖 b)酶切后的質譜結果對照圖。

Lys-C+Tp 酶切后,可以在 m/z=2000 時得到吸收峰,而單獨的 Tp 酶切在 m/z=2000 時沒有吸收峰。該結果表明 Lys-C 可以提高測序覆蓋度。

 

( 數據由大阪醫(yī)療中心和婦嬰健康研究所Y. Wada 博士提供 )



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